豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的原核表達及其核酸適配體的篩選

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摘 要：

本文旨在可溶性原核表達豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）S1蛋白的C端結(jié)合域（S1-CTD），并利用指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(shù)篩選靶向S1-CTD蛋白的DNA適配體，為該病毒治療藥物的開發(fā)以及檢測方法的建立奠定基礎(chǔ)。采用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)，將PEDV-S1-CTD質(zhì)粒與帶有麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）、小分子泛素樣修飾蛋白（SUMO）、反轉(zhuǎn)錄終止因子（NusA）、谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GST）四種促溶標簽的原核表達載體pET21b連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET21b-MBP-S1、pET21b-SUMO-S1、pET21b-NusA-S1、pET21b-GST-S1，將雙酶切鑒定和測序正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21進行誘導(dǎo)表達，選擇可溶性好且表達量高的rMBP-S1重組蛋白進行后續(xù)試驗，Western blot結(jié)果顯示該重組蛋白正確表達，間接免疫熒光試驗（IFA）結(jié)果表明rMBP-S1能與細胞表面受體結(jié)合。（剩余19797字）