miR-375-3p 靶向 Fam229a 調(diào)控豬前體脂肪細(xì)胞分化

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摘 要： 旨在探究 miR-375-3p 對(duì)豬脂肪細(xì)胞生成的調(diào)控作用及靶向 Fam229a 的作用機(jī)制。本研究選取了飼養(yǎng)在相同條件下的10 頭 30 日齡的健康無(wú)病的公豬為研究對(duì)象，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（qPCR）檢測(cè) miR-375-3p 在心臟、肝臟、脾臟等組織的表達(dá)分布及在脂肪細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化不同時(shí)期的表達(dá)水平；利用 miRNA mimic 和 miRNA inhibitor 過表達(dá)和干擾 miR-375-3p，qPCR 檢測(cè)miR-375-3p對(duì)成脂關(guān)鍵基因CEBPα、PPARγ、FABP4表達(dá)的影響，油紅O染色和統(tǒng)計(jì)分析檢測(cè)成脂能力；通過生物信息學(xué)分析和雙熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)預(yù)測(cè)并鑒定miR-375-3p的下游靶標(biāo) Fam229a，并對(duì) Fam229a 進(jìn)行功能驗(yàn)證；最后利用 PSIPRED 軟件、Phyre2.0 軟件和 STRING 網(wǎng)站預(yù)測(cè) Fam229a 下游功能及 qPCR 檢測(cè) Fam229a 對(duì)早期成脂關(guān)鍵基因 CEBPα、CEBPβ、ZFP423 和 ZFP521表達(dá)的影響；上述試驗(yàn)方法均設(shè)立3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。（剩余21218字）