Tollip敲除豬腎細(xì)胞系的構(gòu)建

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摘 要：旨在探究Toll作用蛋白（toll-interacting protein，Tollip）對口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV）增殖的影響，利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)構(gòu)建Tollip基因缺失的豬腎細(xì)胞系（porcine kidney cell line，PK-15），并通過PCR測序和Western blot確認(rèn)敲除效果，然后利用CCK-8試劑盒測定Tollip缺失后細(xì)胞活力變化，確認(rèn)敲除細(xì)胞與野生細(xì)胞無顯著差異，用FMDV感染敲除細(xì)胞后，采用Western blot、間接免疫熒光、實(shí)時(shí)熒光定量和病毒滴度測定等方法測定病毒在敲除細(xì)胞系中復(fù)制情況。（剩余16575字）