基于牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒ORF61基因熒光定量檢測方法的建立

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摘 要：基于國內(nèi)流行的牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒（lumpy skin disease virus，LSDV）的基因組序列，建立了靶向ORF61基因的MGB探針熒光定量PCR檢測方法。本研究基于LSDV基因序列設(shè)計出帶有MGB探針的特異性熒光定量PCR引物，并進行特異性和靈敏性篩選驗證。最終，篩選得到靶向于LSDV ORF61基因的一對qPCR引物；利用pCAGGS-ORF61真核表達質(zhì)粒，獲得標準曲線y=-3.2875x+47.87，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9986，擴增效率達101%；熒光定量PCR特異性試驗、重復性試驗和靈敏性試驗結(jié)果表明，該引物的特異性高、重復性良好和靈敏度高等優(yōu)點；該引物的最低檢測限為6.71拷貝·μL-1，各批次內(nèi)與批次間重復性結(jié)果的變異系數(shù)均小于2%。（剩余14687字）