基于PINK1/Parkin通路探討溫陽(yáng)解毒化瘀方含藥血漿對(duì)肝細(xì)胞損傷的影響

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[摘要]目的 基于PTEN誘導(dǎo)激酶1（PINK1）/E3泛素連接酶（Parkin）通路探討溫陽(yáng)解毒化瘀方含藥血漿對(duì)肝細(xì)胞損傷的影響。方法采用D-氨基半乳糖 （D-GalN）+ 脂多糖（LPS）構(gòu)建肝細(xì)胞損傷模型，實(shí)驗(yàn)設(shè)置對(duì)照組、模型組、空白血漿組、中藥血漿組、3-MA組、中藥 +3-MA 組。CCK-8法篩選含藥血漿最佳干預(yù)濃度及時(shí)間;AnnexinV-APC/PI雙染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;JC-1染色檢測(cè)線粒體膜電位；MitoSOXRed染色檢測(cè)活性氧（ROS）水平;生物化學(xué)法檢測(cè)超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平;透射電鏡觀察肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu);RT-qPCR法檢測(cè)PINK1、Parkin、微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）、螯合體 1（SQSTM1/P62）mRNA 水平;Westernblot法檢測(cè)PINK1、Parkin、LC3、P62、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（ （Bax） 、裂解的胱天蛋白酶-3（cleaved-Cas-pase-3）和胱天蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表達(dá)水平。（剩余19212字）